PRACTICA:
EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE DNA.
ANTECEDENTES:
además del agua, los carbohidratos, las proteínas y los
lípidos, los seres vivos están constituidos por otras moléculas que, aunque en
menor cantidad, desempeñan funciones muy importantes.
Los
ácidos nucleídos (DNA Y ARN) son
biomoléculas solubles en agua que desempeñan funciones diversas, son moléculas
complejas producidas por las células vivas; son esenciales para todos los
organismos vivos. Estas moléculas gobiernan el desarrollo del cuerpo y sus
características específicas, ya que proporcionan la información hereditaria y
ponen en funcionamiento la producción de proteínas.
OBJETIVO:
Extraer
DNA y ARN de tejidos animales o vegetales e identificarlos como tales.
MATERIAL.
v Tubos
de centrifuga 1 ml
v Tubos
de ensayo de 5 ml
v centrifuga
v micro
pipetas de 1000 y 200 ul
v agua
destilada estéril
v etanol
al 100 % frio
v NaCl
3 M
v Buffer
de extracción de DNA
v Fenol
v Mortero
y pistilo
v Hígado
de res
v Papel
aluminio
v Guantes
PROCEDIMIENTO
A) Rompimiento
de membranas y paredes celulares
Toma
una muestra del tejido (5 gr aprox) del hígado de res y homogenizalo, es decir
muélelo en el mortero, si el tejido es muy duro licúalo en seco.
B) Digestión
Coloca
la muestra molida (1 gr aprox) en un tubo de eppendorf de 1 ml y agrégale el
buffer de extracción a temperatura de cuarto (500 ul
aprox)
Cuando hayas agregado el buffer de extracción a tu muestra, agítala e incúbala por 10 minutos con agitación esporádica.
C) Separación
de proteínas, carbohidratos y lípidos
A
la mezcla que tienes en un tubo de ensayo agrégale 500 ul
de fenol, usa guantes y no inhales los vapores.
Agita
vigorosamente en vortex, cuidando que no se tire el contenido del tubo, dejando
reposar a temperatura ambiente por 5 minutos.
Extrae
la fase acuosa (500 ul aprox) con una micro pipeta, si no se
separan las fases centrifuga a 1000 rpm por 5 minutos a una temperatura de 6°
C, ten cuidado de equilibrar la centrifuga.
Extrae
la fase acuosa superior una vez centrifugado.
D) Separación
de ácidos nucleicos DNA y ARN
A
la fase acuosa que extraes (500 ul), colócala en un tubo de
eppendorf limpio y agrégale 400 ul, de etanol (100%) frio y
75 ul
de NaCl 3 M, mezcla por inversión, suave y observa cómo se precipita el DNA.
RECUPERACIÓN DE LA PASTILLA
Centrífuga
tú tubo por 2 minutos a 1000 rpm a temperatura de 6° C y recoge la pastilla del
fondo del tubo.
RESULTADOS
Finalmente
se logro obtener fragmentos de DNA en la muestra de tejido de hígado de res, la
cual se coloco en un tubo de eppendorf para que se pudiera conservar de manera
adecuada la pastilla de ADN.
Como
podemos observar después de la centrifugación se logro obtener biomoleculas por
separados que dando de la siguiente manera como base o en la parte de abajo
encontramos las proteínas, enseguida una capa delgada de carbohidratos y por
último el acido nucleico.
CUESTIONARIO
¿Porque el ADN en solución se precipita en presencia de un
alcohol frió?
Porque
el alcohol hace que el ADN se altere su composición y se vuelva muy pesado esto
hace que se precipite y se concentre en la parte baja del tubo de eppendorf
¿Cómo podrías cuantificar la cantidad de DNA de tu muestra?
Se
utiliza la espectrofotometría utilizando un rango de luz UV, debido a los
anillos presentes en las bases nitrogenadas del ADN, que absorben
máximo a 260 nm.
Espectroscopía de
UV. Los ácidos nucleicos
absorben eficientemente luz ultravioleta debido a la presencia de bases
aromáticas nitrogenadas a lo largo de las cadenas de DNA.
¿Cuál es la función y la importancia del DNA en los organismos?
Tiene
la función de conservar la información genética de cada individuo empaquetado
para que la descendencia cuente con sus características, esto nos da gran importancia porque así mismo
puede duplicarse la información y es uno de las principales biomoleculas ya que
si llegara a faltar la vida no existiría.
BIBLIOGRAFIA.
viaclinica.com/article.php?pmc
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